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    電解質(zhì)梯度測序膠 簡介

    發(fā)布時間： 2021-12-15　　點(diǎn)擊次數(shù)： 914次

    原理

    通過簡單地提高下槽緩沖液的鹽濃度，使凝膠底部的離子強(qiáng)度得以提高，在電泳過程中，鹽離子可以電泳進(jìn)入凝膠并產(chǎn)生重復(fù)性好的及有效的梯度。

    材料與儀器

    DNA
    TBE 乙酸鈉
    電泳儀

    步驟

     

    1.  按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預(yù)電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。

    2.  按基本方案步驟23~26步準(zhǔn)備樣品及加樣。
     
    3.  如需測≤400堿基的序列信息，加入3 mol/l 乙酸鈉于下槽緩沖液至終濃度1 mol/l， 執(zhí)行步驟5。
     
    4.  如果需測大于400堿基的序列信息，先按步驟5進(jìn)行，電泳2~3 h，然后加入3 mol/l 乙酸鈉于下槽至終濃度為1 mol/l。 

    5.  在60 W 恒功率下電泳。

    6.  進(jìn)行基本方案步驟23~33。
     

     

    同實(shí)驗其他方法

    變性凝膠電泳實(shí)驗

    1.  制作每塊凝膠時，首先要用肥皂及水小心嚴(yán)格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2.  然后用Kimwi

    含甲酰胺的測序膠

    1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。 3.  加入0.15 ml TEMED

    緩沖液梯度測序膠

    1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  在2個100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制

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