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    細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)詳解剖析

    發(fā)布時(shí)間： 2022-04-13　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1656次
    細(xì)胞侵襲也是與轉(zhuǎn)移密不可分的。那么今天要分享的是最為常用的細(xì)胞侵襲方法：Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。與細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)相比，Transwell相對(duì)過(guò)程復(fù)雜一些，下面就一起看看腫瘤細(xì)胞Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)吧！


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      細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)示意圖 

    首先，為了對(duì)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有更加清晰的理解，我們先來(lái)了解一下，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過(guò)程，主要包括以下5個(gè)過(guò)程：原位侵襲（Local invasion），腫瘤細(xì)胞內(nèi)滲（Intravasation），循環(huán)系統(tǒng)存活（Survival in thecirculation），腫瘤細(xì)胞外滲（Extravasation），形成轉(zhuǎn)移灶（Micrometastasis formation）等。其中細(xì)胞侵襲便發(fā)生在第一步，即腫瘤細(xì)胞在原位突破基底膜，然后內(nèi)滲進(jìn)入血管、淋巴管的過(guò)程，后期才開始進(jìn)行轉(zhuǎn)移。
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      腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過(guò)程  

    Trans可譯為轉(zhuǎn)移，穿過(guò)，而well則為小室的意思。外形如同一個(gè)小杯子（如下圖），杯底有通透性的膜（孔徑0.1－12.0µm，細(xì)胞侵襲一般用8.0、12.0μm）。
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    Transwell原理簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，并將高營(yíng)養(yǎng)液與低營(yíng)養(yǎng)液用一層膜隔開，并在膜上室鋪基質(zhì)膠，用來(lái)模擬體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)。腫瘤細(xì)胞放在低營(yíng)養(yǎng)液中，為了獲得更多的營(yíng)養(yǎng)吃的更飽，這些細(xì)胞需先分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）將基質(zhì)膠降解，才能穿過(guò)這層膜，進(jìn)入高營(yíng)養(yǎng)液，最后通過(guò)計(jì)數(shù)下室的細(xì)胞量即可反映腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)，可作為一種非常簡(jiǎn)便的研究腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲以及轉(zhuǎn)移情況的方法。
     
    實(shí)驗(yàn)做完后就是最重要的結(jié)果統(tǒng)計(jì)了！

    檢測(cè)穿過(guò)的細(xì)胞數(shù)一般有兩種方法：

    1.直接計(jì)數(shù)法
    ①“貼壁"細(xì)胞計(jì)數(shù)
    這里所謂的“貼壁"是指細(xì)胞穿過(guò)膜后，可以附著在膜的下室側(cè)而不會(huì)掉到下室里面去。可以通過(guò)給細(xì)胞染色（如結(jié)晶紫染色、臺(tái)盼藍(lán)染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色），在鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞。
    ②“非貼壁"細(xì)胞計(jì)數(shù)
    由于某些細(xì)胞自身的原因或某些膜的關(guān)系，有時(shí)細(xì)胞在穿過(guò)膜后不能附著在膜上，而是掉進(jìn)下室。這種情況下可以收集下層培養(yǎng)液，用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞量，也可用細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法直接在鏡下計(jì)數(shù)。
     
    2.間接計(jì)數(shù)法
    間接計(jì)數(shù)法主要用于穿過(guò)細(xì)胞過(guò)多，而無(wú)法通過(guò)計(jì)數(shù)獲得準(zhǔn)確的細(xì)胞數(shù)所采用的方法，通過(guò)標(biāo)記、染色處理（例如MTT法、熒光試劑檢測(cè)、結(jié)晶紫檢測(cè)）后，測(cè)量OD值或熒光值，間接反映細(xì)胞數(shù)量。
     
    文章中出現(xiàn)的Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)圖一般是這樣的：
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    （小tips：NC 即Negative control，表示陰性對(duì)照，siRNA上期剛說(shuō)過(guò)，大家還記得嗎？
    文章中大家可能還會(huì)遇到MOCK組，其實(shí)就是空白對(duì)照。所謂的空白對(duì)照有兩種：一種是什么也不處理，類似陰性對(duì)照組；一種是只加轉(zhuǎn)染試劑，不加轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒或者siRNA，類似假手術(shù)組）
     
    這張圖表示的是NC組（對(duì)照組）細(xì)胞侵襲少于siRNA組（沉默某基因的表達(dá)），可以理解為沉默某基因后，可以促進(jìn)HGC-27細(xì)胞的侵襲。
     
    當(dāng)然，這張圖是比較簡(jiǎn)單的，復(fù)雜一點(diǎn)的無(wú)非就是條件多了，數(shù)據(jù)多了，大家只要理清楚細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)的原理，知道圖是怎么做出來(lái)的，對(duì)應(yīng)著圖注都可以很輕松的理解圖所表達(dá)的意思。



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