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免疫組織化染色
發布時間: 2023-04-10 點擊次數: 760次材料與儀器
新鮮組織
二甲苯 酒精 H2O2 抗原修復液 枸櫞酸鈉緩沖液 石蠟 福爾馬林 PBS DAB 蘇木素 樹膠 丙酮 打孔液 檸檬酸鈉 APES
恒溫搖床 高壓鍋 塑料切片架 耐溫玻璃容器 -80℃冰箱 恒冷冰凍切片機 載玻片步驟
一.石蠟切片免疫組化染色實驗步驟:1.石蠟切片脫蠟至水:(石蠟切片染色前應置60℃ 1 小時)。(1)二甲苯I、II,各10 分鐘。(2)梯度酒精:100%,2 分鐘® 95%,2 分鐘® 80%,2 分鐘® 70%2 分鐘。(3)蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。2.過氧化氫封閉內源性過氧化物酶:3%H2O2,室溫10 分鐘(避光)。3.蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。4.抗原修復:根據待檢測的抗原,選擇適當的方法。附:抗原修復液(10mM pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液)的配制(1)儲備液的配制:A 液:枸櫞酸三鈉-2H2O 29.41g + 蒸餾水1000mlB 液:枸櫞酸21g + 蒸餾水1000ml(2)工作液的配制:A 液82ml + B 液18ml + 蒸餾水900ml抗原修復的方法:(1)高壓鍋處理技術:枸櫞酸鈉緩沖液(10mM,PH6.0),淹沒切片,蓋上鍋蓋,高壓鍋內煮沸,上汽3 分鐘后緩慢冷卻(可用自來水在高壓鍋外沖,以助冷卻)。(2)微波處理技術:用塑料切片架,置于塑料或耐溫玻璃容器內,枸櫞酸鈉緩沖液淹沒切片,選擇中高或高檔,5 分鐘;取出并補充已預熱的枸櫞酸鈉緩沖液;再選擇中高或高檔,5 分鐘(. 最佳溫度為92~95℃)(3)酶消化處理:此略。抗原修復的注意事項:(1)組織不能干。(2)選擇抗原修復方法要因抗體而異。(3)該方法主要用于10%福爾馬林固定、石蠟包埋組織。(4)抗原修復后至DAB 顯色的過程中,均需用PBS 緩沖液。5.PBS:5 分鐘,2 次(置于搖床)。6.正常血清封閉:從染片缸中取出切片,擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分(保持組織呈濕潤狀態),滴加正常山羊或兔血清(與第二抗體同源動物血清)處理,37℃,15 分鐘。
深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、壹流的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,旨在為生命科學的發展提供壹流的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線,在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩定的產品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優質客戶提供優質的產品、技術支持與服務。
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